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“这个实验其实不不难,一共只分为两步。”

“首先是聚合酶链式反应,即PCR扩增反应;第二步是酶切反应。”

张兴运介绍道。

第一步,在PCR扩增反应部分,只需要跟着想要的结果,明确各种试剂和样品的加入量以及扩增条件,按照正常的要求操作即可。

需要注意的是,吸取试剂时,一定要排尽气泡,由于试剂的加入量都非常小,滴加试剂时,常常出现试剂聚集在枪头尖端,形成一个小液滴,难以滴下,可以将液滴打到离心管内壁上。

利用其与离心管内壁的吸附作用力,将液滴留在离心管内。

最后,再用无菌超纯水补足3滴反应体系后,将离心管盖盖好,至于离一t2机中,离心30秒,以使试剂、样品和水在离心管底部充分混匀。

更有利于PCR反应的顺利进行,可以大大增加扩增反应的成功率。

至于酶切反应。

可以在滴加实验一得到的结果后,再滴加适量BSA,它是一种酶切反应催化剂,能够使酶切反应进行更彻底。

酶切效果更好:通常试剂一与BSA的体积比约为1:2。

“我们在在川贝母的PCR鉴别试验中,SmaI加入量为0。5斗l,BSA的加入量为1斗。滴加BSA后,酶切反应的体系仍为20斗,所以无菌超纯水的加入量要相应减少。酶切反应的条件应设置为30,反应2h。”张兴运说道。

陈浩然还是沉默。

但这种沉默已经代表了一种态度。

不赞同,不拒绝。就静静的看着,即便你作死也好,即便你成仙也罢,他都这么静静的看着。

当然,实验室里面的实验还在继续。

“电泳检测酶切反应完成后所得到的溶液。得到的结果是?”杨光问道。

“含有标准规定的长度在100~250bp的两条DNA条带,需要用琼脂糖凝胶电泳法进行检视。”终于回答道。

走到这一步,实验的还在继续。

但至少杨光并没有再提出什么质疑。

钟医和杨光还是按照实验步骤再进行,首先,需要制胶和配制电泳缓冲液,制胶用缓冲液和电泳缓冲液应保持一致,用百分之1的TAE或TBE即可。

“注意,在制胶过程中注意做好防护,切勿烫伤。

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”钟医提醒道。

“假好心。我会出事?”杨光没气的说道。

两人,待胶溶液温度下降至60℃左右时,滴加少量GelRed,振摇混匀后缓慢倾倒人插好梳子的胶槽中,他们尽量不产生气泡,以免影响电泳效果。

待胶凝固并冷却至室温后。即可将其转移至电泳槽中,准备电泳。

下一步,两人依次将样品、对照药材、空白对照加入胶孑L中。

杨光特别小心,手十分稳,没有戳破胶孑L边缘或戳穿胶孔底部。以免影电泳效果。

“他们现在再加加样缓冲液,这样做主要是两个作用。”

“一方面其密度较大,可使样品沉积在胶孔底部,避免样品上浮外溢,保障电泳条带密集紧凑,防止扩散。”

“另一方面,其中添加染色剂。可以在电泳过程中指示前沿。电泳结束后。可将凝胶置于凝胶成像仪上进行检视。”

张兴运说道。

而杨光这么一路实验坐下来,正如张兴运在报告之中所写的那样。

在与对照药

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材凝胶电泳图谱相应的位置上,在100~250bp应有两条DNA条带,空白对照无条带。

只有一点有点问题。

“为什么其中有一条条带中出现弥散的情况?”杨光疑惑的问道。

“出现弥散的原因只可能两种。”钟医想了想回答道:“一方面可能是制胶所用缓冲液与电泳缓冲液不一致,应保持一致。另一种,可能是电泳缓冲液长期未更换,缓冲盐浓度变化,或缓冲液被污染,应及时更换缓冲液。”

钟医的回答打消了杨光的疑惑。

实验做到这儿,杨光也明白了,钟医没有撒谎,张兴运的报告百分之百真实。

整个实验的难点就在于酶切反应。

但是两人都是实验室的好手,自然不会因为这一点小问题出问题。

“现在华夏有什么重要是用了分子生物学技术在中药鉴定方面吗?我说的是已经有标准的。”杨光问道。

“目前仅有蕲蛇、乌梢蛇的分子生物学鉴别收入我国医药中标准,分别采用了PCR和聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性鉴别方法。还有就是我们刚刚做的川贝了。”钟医回答道。

是的,分子生物学技术在中药鉴定方面的应用方兴未艾。

这是一场危机,也是一个机遇。

就如同DNA条形码方法在中药材鉴定方面取得较好的效果一样。

中药鉴定道阻且长,需要经验鉴别、分子生物学技术、理化鉴别和显微技术的共同合作。才能真正实现中药材和饮片的明确鉴定,才能保障中药和中医产业的长足发展。

“我无话可说,我这边让你们过了。”杨光摆了摆手说道。

是的,从科学上,从实验上,从药理上,杨光都无话可说。

在钟医的指导下,杨光的这个研究严密到不可思议的一个地步,让人想要从中早一点什么错误出来都特别的难。

听到杨光这么说,外面已经传来了压抑不住的欢呼声。

“张兴运医生这也太强了吧。他不是中医嘛,竟然也能让杨光哑口无言。”

“废话,只要道理还是那个道理,那么掌握真理的人一定不怕什么的。”

“我们赢了吗?这一局我们赢了吗?”

“看来真理还是站在我们这一边的。”

中医院的众人已经按捺不住喜悦了,纷纷的笑了起来,说话的声音都开始变大了。

这还不是重头戏。

几大药厂那边也在交头接耳,像是在商量着什么,虽然不知道他们小声在说些什么。不过从他们眼神中流露出的渴望和饥渴,也能够看出他们的目的了。

“我们哈市对这个药志在必得啊。你们不知道,我们一到冬天就容易出现这些状况,现在有一个药这么好……”纪建同说道。

“等等。我们沪市可不会让啊。”范乐生也连忙打断了纪建同。

这才开始,药厂就已经争了起来。

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